Определение стеринов (ГХ)

Определение стеринов проводят методом газовой хроматографии (2.1.2.27)

Испытуемый раствор. Растворяют фракцию стеринов, выделенную из испытуемого раствора методом тонкослойной хроматографии на предыдущем этапе, в смеси 0,2 мл пиридина безводного P и 0,2 мл смеси хлортриметисилан P - N,O-бис(триметилсилил)трифторацетамид P (1:99, об/об), пробирку плотно закрывают пробкой и нагревают при температуре 80 °C в течение 20 мин. Затем охлаждают и используют жидкую фазу.

Раствор сравнения. Растворяют фракцию стеринов, выделенную из раствора сравнения методом тонкослойной хроматографии на предыдущем этапе, в смеси 0,2 мл пиридина безводного P и 0,2 мл смеси хлортриметисилана P - N,O-бис(триметилсилил)трифторацетамида P (1:99, об/об), пробирку плотно закрывают пробкой и нагревают при температуре 80 °C в течение 20 мин. Затем охлаждают и используют жидкую фазу.

Также может быть использован СО ФЕАЭС холестерина отдельно или в смеси со стериновой фракцией подсолнечного масла. Дериватизацию проводят в соответствии с указаниями для испытуемого раствора.

Условия хроматографирования:

- колонка: капиллярная колонка из термостойкого кварца, длиной 30 м и внутренним диаметром 0,25 мм, покрытая слоем поли[метил(95)фенил(5)]силоксаном P толщиной 0,25 мкм;

- газ-носитель: гелий для хроматографии P;

- скорость газа-носителя: 2,6 мл/мин;

- деление потока: 1:25;

- объем вводимой пробы: 1 - 3 мкл (в зависимости от ожидаемого количества стеринов в испытуемом растворе);

- режим изменения температуры:

Идентификация пиков (раствор сравнения): пики кампестерина, стигмастерина, и , стеринов и относительные удерживания пиков по отношению к пику , которые приведены в таблице 2.1.8.26.-1.

Пригодность системы (раствор сравнения):

- разрешение: не более 4,0 между пиками кампестерина и стигмастерина.

Содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого образца в процентах рассчитывают по формуле:

,

где: S_i - площадь пика определяемого стерина на хроматограмме испытуемого образца;

- сумма площадей всех пиков стеринов, указанных в таблице 2.1.8.26.-1, кроме пика бетулина.