АНАЛИЗ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ

Автоматическая стандартизация

Для анализа клеток, меченных с применением коммерчески доступных наборов, производители разрабатывают критерии для настройки проточного цитометра. Данные настройки затем автоматически переносят в протокол анализа испытуемых образцов. Для настройки фотоумножительной трубки на заданные значения используют специальные флуоросферы, устанавливают поправку и проверяют систему с помощью контрольных образцов.

Настройки системы

Пороговое значение: во избежание учета дебриса (низкий уровень прямого светорассеяния) вместо мелких форм лимфоцитов, на графике светорассеяния устанавливают порог прямого угла рассеяния.

Высоковольтные настройки фотоумножительной трубки: должны быть совместимы с анализом поверхностных клеточных маркеров; устанавливают в каждой лаборатории таким образом, чтобы была возможность различить отрицательные и положительные популяции клеток с умеренной плотностью антигенов; напряжение фотоэлектронных умножителей необходимо периодически проверять и настраивать в соответствии со стандартными процедурами, принятыми в лаборатории.

Поправка: должна быть применена в случае интерференции в видимом диапазоне спектра (например, ФИТЦ/фикоэритрин), обнаруженной при анализе поверхностных клеточных маркеров; поправку на цвет анализируют и настраивают в соответствии со стандартными процедурами, принятыми в лаборатории.

Скорость потока: должна подходить для рутинного анализа поверхностных клеточных маркеров.

Диапазоны гейтирования: области, установленные для образцов CD34/CD45, которые оставляют неизменными для анализа отрицательной области.

Расчет абсолютного количества клеток CD34+/CD45+

Абсолютное количество клеток CD34+/CD45+ рассчитывают по формуле:

n · D · V

где: n - общее количество клеток CD34+/CD45+ в микролитре;

D - фактор разведения;

V - объем испытуемого образца, в микролитрах

Результаты испытания выражают как содержание клеток CD34+/CD45+ в процентах, так и абсолютное количество клеток в микролитре. Если применимо, результаты могут быть выражены в абсолютном количестве клеток на килограмм массы тела реципиента.

201110008-2023