ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИСПЫТАНИЯ

Важнейшим условием для обеспечения качества испытания клоногенности является использование строго стандартизованных процедур, в валидацию которых следует включать проведение внутри- и межлабораторных испытаний.

Источники материалов, в том числе реактивов, факторов роста и расходных одноразовых материалов, должны быть идентифицированы и документированы.

Основными факторами, влияющими на вариабельность испытания клоногенности, являются количество внесенных в лунки клеток и идентификация колоний. Для одного и того же испытания может наблюдаться внутрилабораторная вариабельность до 15%. Если необходимо оценить количество КОК в чистой клеточной популяции, можно использовать подход с предельным разведением, при котором количество лунок с наблюдаемой клеточной пролиферацией измеряют с помощью автоматизированной системы.

Другой важной причиной вариабельности является использование в испытании материалов сложного неопределенного состава (например, эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота или бычьего сывороточного альбумина), полученных из пулов исходных материалов и способствующих неспецифической стимуляции клеточной пролиферации. Однако довольно часто встречаются серии материалов с особыми характеристиками, которые селективно стимулируют пролиферацию специфических гемопоэтических линий.

Для проведения клоногенного анализа целесообразно использовать материалы с низким содержанием эндотоксинов (менее 0,01 МЕ/мл или менее 0,01 МЕ/мг), поскольку более высокое их содержание приводит сначала к последовательному изменению экспрессии гемопоэтических клонов в культурах, а впоследствии - в целом к ингибированию клеточной пролиферации и клоногенеза.