Лабораторная диагностика лихорадки Зика

1703. Все работы с материалом, подозрительным на заражение вирусом Зика, включая забор, транспортировку и подготовку материала для исследований, проводят в соответствии с требованиями главы IV Санитарных правил.

1704. Лабораторные исследования клинического, секционного, энтомологического материала, подозрительного на заражение ВЗ, сопровождающиеся выделением вируса, проводят в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на работу с ПБА II группы патогенности.

1705. Исследования на наличие маркеров ВЗ в материале от людей и энтомологическом материале без выделения возбудителя серологическими методами и методом амплификации нуклеиновых кислот могут быть проведены в лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на работу с ПБА III - IV групп патогенности.

1706. Для установления этиологии заболевания и лабораторного подтверждения клинического диагноза ЛЗ проводят исследование клинического материала:

1) от больных (подозрительных на заболевание): кровь, сыворотка, плазма крови, слюна, моча, сперма (по показаниям), вагинальный мазок, амниотическая жидкость (по показаниям), плацента, грудное молоко;

2) от новорожденных от матерей с подтвержденной ЛЗ: плазма крови, пуповинная кровь, фрагмент пуповины, моча, слюна, спинномозговая жидкость (по клиническим показаниям);

3) аутопсийного материала: ткани селезенки, лимфоузлов, мозга, легких, печени, почек.

1707. Материалом для исследования могут служить объекты окружающей среды - кровососущие комары Ae. aegypti и Ae. albopictus.

1708. Забор, упаковку и доставку материала от больных проводят медицинские работники медицинских организаций. Процедуру по забору материала осуществляют в защитной одежде, соответствующей противочумному костюму II типа, разрешенной к применению.

1709. Иммунологические (серологические) исследования и ПЦР-исследования проводят в боксированном помещении, оборудованном системами приточной и вытяжной вентиляции или в боксах микробиологической безопасности II класса.

1710. Лабораторную диагностику ЛЗ проводят серологическими, молекулярно-генетическими и вирусологическими методами. Комплексная диагностика включает:

1) выявление антигена ВЗ в исследуемом биологическом материале с помощью ИФА или реакций нейтрализации вируса (далее - РН);

2) определение в сыворотке крови больного специфических IgM и IgG (или суммарных) антител к ВЗ с помощью ИФА или РН, а также МФА, ИХА;

3) выявление в образцах биологического материала РНК ВЗ с помощью ОТ-ПЦР;

4) изоляция вируса при проведении обогатительного пассажа в культурах клеток или при инфицировании чувствительных лабораторных животных с последующей его идентификацией.

Для лабораторной диагностики ЛЗ используют диагностические наборы, зарегистрированные в Российской Федерации.

1711. ВЗ или его специфические маркеры (РНК или антиген) могут быть обнаружены в биологических жидкостях больного в первые дни болезни; в более поздние сроки заболевания и в период реконвалесценции диагностическим критерием служит выявление антител к возбудителю. Определение РНК ВЗ проводят:

1) в моче - в течение первых двух недель заболевания с пиком на 5 - 7 календарный день, детекция возможна до 20 календарных дней и более;

2) в слюне - в первые 7 - 10 календарных дней болезни с пиком на 5 - 7 календарный день, в ряде случаев РНК вируса детектируется в слюне до 30 календарных дней и более;

3) в сыворотке и плазме крови - в течение 3 - 5 календарных дней после начала клинических проявлений; максимальная концентрация, в основном, обнаруживается в первые два дня заболевания. У инфицированных ВЗ беременных в результате амплификации вируса в плаценте и возможном внутриутробном инфицировании плода РНК вируса обнаруживается в плазме и сыворотке крови в течение трех месяцев от момента заболевания;

4) в цельной крови (в ряде случаев более эффективно, чем в ее плазме или сыворотке) в период реконвалесценции - в течение трех месяцев от начала заболевания;

5) в семенной жидкости - до полугода;

6) в вагинальном секрете РНК ВЗ определяется в первые десять календарных дней заболевания;

7) в грудном молоке РНК ВЗ обнаруживается в том случае, если инфицирование беременной произошло на поздних гестационных сроках: после 35 недели.

Ввиду низкой концентрации вируса в плазме и сыворотке крови эффективно обнаружение РНК ВЗ в комбинации образцов моча/слюна/кровь.

В случае трансплацентарной передачи ВЗ, вирусная РНК может быть обнаружена в амниотической жидкости (амниоцентез не проводят ранее 14 недели гестации). В случае гибели плода во время беременности или родов исследуют ткани плаценты, пуповины и ткани внутренних органов плода на наличие РНК ВЗ.

1712. При обследовании новорожденного от матери, у которой диагностирована ЛЗ, либо данные обследования матери отсутствуют, но имеется соответствующий эпидемиологический анамнез (выезд во время беременности в эндемичный по ЛЗ регион), проводят исследование пуповинной крови, трех фрагментов пуповины длиной 1 см, взятых в центральной и двух периферийных частях сразу после родов, а также плаценты. Также исследуют сыворотку крови, взятую в первые два дня после рождения, на наличие РНК ВЗ и специфических IgM. В первую неделю после рождения исследуют мочу новорожденного на наличие РНК ВЗ. В случае обнаружения нарушений развития ЦНС в первые два дня жизни ребенка проводят исследование спинномозговой жидкости на наличие РНК ВЗ.

1713. Определение специфических IgM осуществляется на 5 календарный день после начала клинических проявлений заболевания. Концентрация специфических IgM достигает максимума на 2 неделе заболевания. Забор парных сывороток для подтверждения сероконверсии осуществляется с интервалом 10 - 14 календарных дней. Специфические IgG начинают определяться в среднем с 10 - 14 календарного дня болезни.

При анализе результатов ИФА на специфические антитела к ВЗ следует учитывать возможность перекрестных реакций с другими флавивирусами (вирусами денге, Западного Нила, желтой лихорадки, японского энцефалита, энцефалита долины Мюррей). Для дифференциальной серологической диагностики используют диагностические наборы для выявления антител к вышеперечисленным арбовирусам с учетом эпидемиологического анамнеза.

1714. Клинический диагноз ЛЗ считают подтвержденным при наличии одного из критериев:

1) обнаружение РНК ВЗ в биологическом материале;

2) обнаружение антигена ВЗ в биологическом материале;

3) изоляция и идентификация ВЗ из биологического материала;

4) обнаружение IgM к ВЗ в сыворотке крови в острый период заболевания в совокупности с выявлением IgG в парной сыворотке;

5) обнаружение сероконверсии или четырехкратного возрастания титров специфических антител IgG к ВЗ в парных сыворотках крови, взятых с интервалом 10 - 14 календарных дней.

Положительные на ВЗ образцы направляют для верификации и дополнительных исследований в Центр индикации возбудителей инфекционных болезней I - II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности, курирующий данную территорию, в референс-центр по мониторингу за ЛЗ и Центр верификации диагностической деятельности в отношении возбудителей вирусных инфекционных болезней, осуществляющий функцию государственной коллекции Роспотребнадзора.