III. Описание метода

3.1. Принцип тестирования основывается на одновременной амплификации участков кДНК гемагглютинина (далее - НА) вирусов гриппа B линий Виктория и Ямагата и кДНК экзогенного внутреннего контрольного образца (далее - ВКО) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.

3.2. Амплификация кДНК НА вируса гриппа B проводится при помощи специфичных к этому участку праймеров и фермента ДНК-полимеразы.

3.3. В реакции амплификации участвуют флуоресцентно меченые олигонуклеотиды, комплементарные участкам амплифицируемых кДНК-мишеней, фланкированных праймерами, что позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме реального времени.

3.4. С целью контроля качества при проведении ПЦР используется ВКО и контрольные реакции, в которых участвуют положительные и отрицательные контрольные образцы всех этапов ПЦР-анализа.

3.5. ВКО позволяет контролировать все этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на результаты ПЦР-исследования.

3.6. Рекомендуется использовать набор реагентов, позволяющий проводить одновременную амплификацию (в одной пробирке) трех кДНК-мишеней (НА вируса гриппа B линия Виктория, НА вируса гриппа B линия Ямагата и ВКО) и имеющий защиту от контаминации ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-гликозилазы и дезоксиуридинтрифосфата.

3.7. Перечень материально-технического обеспечения, необходимого для проведения исследования методом ПЦР с детекцией флуоресцентного сигнала в режиме реального времени, представлен в приложении 1 к настоящим МР.