III. Подготовка штаммов и выделение ДНК BRUCELLA spp

3.1. Идентифицируют и типируют только выделенные культуры бруцелл или подозрительные на бруцеллы изоляты.

3.2. Штаммы бруцелл выращивают на бруцеллагаре или аналоге в течение 48 ч при температуре 37 +/- 1 °C.

3.3. Из культур бруцелл или подозрительных изолятов готовят суспензии в 2 мл 0,9%-го раствора натрия хлористого по отраслевому стандартному образцу мутности 10 единиц, что соответствует 1,7 x 10⁹ м.к./мл для Brucella spp.

3.4. К суспензии добавляют мертиолят натрия до конечной концентрации 1:10000 (0,01%) с последующим прогреванием при температуре 56 °C в течение 30 мин. Затем 100 мкл образца переносят в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл, содержащую лизирующий раствор на основе 6 моль гуанидинизотиоцианата, в объеме, указанном в инструкции к набору для выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты (далее - ДНК), и инкубируют в течение 15 минут при температуре 65 °C. После выполнения данного этапа материал считается обеззараженным.

3.5. Выделение ДНК для генетических методов выполняют в соответствии с инструкцией к используемому набору реагентов.