3.2.6. Двойной перекрест

(на примере биологической активности инсулина методом A и B)

Таблица 3.2.6.-19. - Схема двойного перекреста

Биологическую активность инсулина определяют по его гипогликемическому действию.

В качестве ответа животного (y) принимают:

- для кролика

1) сумму двух концентраций глюкозы в крови через 1 ч и 2,5 ч после подкожной инъекции инсулина (взятие крови из краевой вены уха, допускается погрешность +5 мин)

или

2) среднюю величину, на которую снижается концентрация глюкозы в крови через 1 и 2,5 часа после подкожного введения инсулина, выраженную в процентах по отношению к исходной (взятие крови из краевой вены уха, допускается погрешность +/- 5 мин);

- для мыши - концентрацию глюкозы в крови через 40 мин после подкожной инъекции (взятие крови из орбитального синуса).

В обоих случаях схема расчетов одинакова.

Ниже приведен пример обработки результатов двойного перекреста на 4 группах белых мышей (по 12 особей в группе). В таблице 3.2.6-20 приведены ответы животных на введение двух доз стандартного образца и двух доз испытуемого образца инсулина (соотношение доз 1:2,667).

Таблица 3.2.6.-20. - Ответы мышей на инъекцию инсулина по схеме двойного перекреста (концентрация глюкозы (мг%) в крови животных через 40 мин после введения)

Для того чтобы проверить статистическую значимость источников вариации, пригодность результатов и вычислить дисперсию опыта, проводят дисперсионный анализ полученных данных. При этом рассчитывают значения дисперсий для 11 источников (сводная таблица 3.2.6.-22).

Для этого на основании данных, представленных в таблице 3.2.6.-20 и 3.2.6.-21, а также поправочного коэффициента, вычисляют суммы квадратов источников дисперсии.

Таблица 3.2.6.-21. - Суммы ответов и контрасты (двойной перекрест на мышах)

Таблица 3.2.6.-22. - Сводная таблица дисперсионного анализа (двойной перекрест на мышах)

Поправочный коэффициент

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

Отклонение (1) = блоки - непараллельность -

- (дни · препараты) - (дни · регрессию) = 13547,91;

Отклонение (2) = итог - - блоки - препараты - регрессия -

- дни - (дни · непараллельность) = 8398,75.

Значимость различий дисперсий проверяют с помощью критерия Фишера. Обязательным является выполнение требований для показателей Регрессия и Дни · непараллельность. Регрессия характеризует дозозависимость, а Дни · непараллельность - показатель групповой устойчивости, характеризующий согласованность углов наклона линий дозозависимости в первый и второй день. Для Регрессии наблюдаемое значение критерия Фишера должно быть больше критического (p = 0,01), а для показателя Дни · непараллельность - меньше критического (p = 0,05).

Для того чтобы найти F_набл., средние квадраты показателей Непараллельность, Дни · препараты и Дни · регрессию делят на средний квадрат показателя Отклонение (1), а все остальные - на средний квадрат Отклонения (2). Полученные результаты сравнивают с табличными критическими значениями критерия Фишера (таблица 2 Приложения). Число степеней свободы f₁ = 1, а f₂ = 44.

Вычисление биологической активности и ее доверительных границ

Соотношение доз равно 2,667, следовательно I = lg2,667 = 0,4260;

t = 1,958788 + 2,429953 / f + 2,189891 / f² +

+ 4,630189 / f³ + 1,398179 / f⁹ = 2,02

(f = 44 и p = 0,05);

;

;

;

;

A_U = 100 МЕ/мл

.

Биологическая активность

R_U = 10^2,0369 = 108,87 МЕ/мл

C = E / (E - s²t²) =

= 13968,38 / (13968,38 - 190,88 · 2,02²) = 1,0591.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца вычисляют по формуле:

.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца составляют 1,9351 и 2,1431.

Таким образом, биологическая активность испытуемого образца равна 108,9 МЕ/мл. Ее доверительные границы составляют 10^1,9351 - 10^2,1431, т.е. 86,1 - 139,0 МЕ/мл.