КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ (Метод B)

Этим методом определяют содержание бактериальных эндотоксинов с помощью ряда последовательных разведений испытуемого лекарственного средства.

Процедура испытания. Для проведения анализа готовят Растворы A - D по схеме, приведенной в Таблице 2.1.6.8.-4.

Таблица 2.1.6.8.-4. - Схема эксперимента "Количественный анализ"

Растворы A - разведения испытуемого лекарственного средства, начиная с того разведения, в котором отсутствуют мешающие факторы, до наибольшего разведения, не превышающего МДР.

Раствор B - наименьшее разведение из серии разведений раствора A, к которому добавлен раствор КСЭ. Конечная концентрация эндотоксина в анализируемом растворе должна составлять , (положительный контроль испытуемого образца).

Растворы C - серия разведений КСЭ в воде для БЭТ (положительный контроль).

Раствор D - вода для БЭТ (отрицательный контроль).

Результаты и интерпретация. Анализ считают достоверным, если:

- для раствора D (отрицательный контроль) получены отрицательные результаты в двух повторностях;

- для растворов C (положительный контроль) среднее геометрическое значение концентрации бактериальных эндотоксинов составляет не менее и не более ;

- для раствора B (положительный контроль испытуемого образца) получены положительные результаты в двух повторностях.

Для растворов A конечной точкой реакции является положительный результат, полученный для наибольшего разведения испытуемого лекарственного средства.

Значение произведения фактора этого разведения на величину чувствительности лизата амебоцитов () равно концентрации эндотоксина в растворе A, полученной для данной повторности. Среднее геометрическое значение концентрации эндотоксина рассчитывают, как описано в разделе "Подтверждение заявленной чувствительности лизата амебоцитов".

Если во всех повторностях серии растворов A получены отрицательные результаты, то концентрация бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве меньше величины произведения чувствительности лизата амебоцитов и наименьшего фактора разведения. Если во всех повторностях серии растворов A получены положительные результаты, то концентрация бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве больше величины произведения чувствительности лизата амебоцитов и наибольшего фактора разведения.

Лекарственное средство считают выдержавшим испытание, если определенное в эксперименте среднее значение содержания бактериальных эндотоксинов менее значения предельного содержания бактериальных эндотоксинов, указанного в фармакопейной статье лекарственного средства.