3-1. ЭНТЕРОБАКТЕРИИ, УСТОЙЧИВЫЕ К ЖЕЛЧИ

3-1-1. Испытание на отсутствие энтеробактерий, устойчивых к желчи (качественный метод). Для восстановления жизнеспособности микроорганизмов используют предварительную инкубацию испытуемого образца в жидкой питательной среде. С этой целью 10,0 г или 10,0 мл испытуемого образца переносят в 90 мл соево-казеинового бульона (или среды N 8), перемешивают и инкубируют при температуре (22,5 +/- 2,5) °C в течение 2 ч, но не более 5 ч.

После инкубации снова перемешивают содержимое флакона, в котором проводилось восстановление жизнеспособности микроорганизмов (гомогенат A), и переносят 10 мл (количество, соответствующее 1 г или 1 мл испытуемого образца) в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя). Посевы инкубируют в течение 24 - 48 ч в стандартных условиях. Делают пересев бактериологической петлей на агар Мосселя или среду N 4, которую инкубируют в течение 18 - 24 ч.

Если на агаре Мосселя выявлены типичные колонии энтеробактерий, по морфологическим и тинкториальным свойствам представляющие собой грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие цитохромоксидазой (п. 4-1), считают, что исследуемый образец контаминирован энтеробактериями, устойчивыми к желчи.

3-1-2. Количественное определение энтеробактерий, устойчивых к желчи. Для посева используют 3 пробирки с 9 мл бульона Мосселя в каждой. Гомогенат А в количестве 1 мл (соответствует 0,1 г или 0,1 мл испытуемого образца) вносят в первую пробирку, тщательно перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,01 г или 0,01 мл испытуемого образца) во вторую пробирку, снова перемешивают и переносят 1 мл (соответствует 0,001 г или 0,001 мл испытуемого образца) в третью пробирку, меняя пипетку после каждого шага. Посевы инкубируют в течение 24 - 48 ч.

Для подтверждения отсутствия энтеробактерий, устойчивых к желчи, делают пересев бактериологической петлей из каждой пробирки с видимым ростом на агар Мосселя (среда N 4) и инкубируют чашки Петри в течение 18 - 24 ч. Проводят микроскопическое исследование обнаруженных на плотной среде колоний. Выявление грамотрицательных палочковидных неспорообразующих бактерий свидетельствует о присутствии в ЛС энтеробактерий, устойчивых к желчи. Наиболее вероятное количество устойчивых к желчи энтеробактерий в 1 г (мл) испытуемого образца определяют по табл. 2.1.6.7.-1.

Таблица 2.1.6.7.-1. - Интерпретация результатов

Обозначения: + - наличие роста; - - отсутствие роста.