3.2.4. Двухдозовый латинский квадрат (на примере биологической активности окситоцина на изолированном органе)

При использовании в качестве тест-объекта изолированного рога матки крысы, помещенного в термостатируемую ванночку с питательным раствором. Ответами изолированного органа являются величины изотонических сокращений после введения в равных объемах двух концентраций стандартного образца и двух концентраций испытуемого образца окситоцина. Сокращения регистрируют в виде амплитуды перемещения писчика регистрирующего устройства или, в случае компьютеризированного прибора, автоматически регистрируют с помощью программного обеспечения. Порядок введения стандартного образца и испытуемого образца приведен в таблице 3.2.4.-11.

Таблица 3.2.4.-11. - Порядок введения доз стандартного образца и испытуемого образца окситоцина в ванночку (схема двухдозового латинского квадрата)

Для того чтобы проверить статистическую значимость источников вариации, пригодность результатов и вычислить дисперсию опыта, проводят дисперсионный анализ полученных данных. При этом рассчитывают значения дисперсий для 8 источников (сводная таблица 3.2.4.-14).

Для этого на основании данных, представленных в таблицах 3.2.4.-12 и 3.2.4.-13, а также поправочного коэффициента, вычисляют суммы квадратов источников дисперсии.

Таблица 3.2.4.-12. - Ответы изолированного органа (см) на введение стандартного образца и испытуемого образца окситоцина (схема двухдозового латинского квадрата)

Таблица 3.2.4.-13. - Суммы ответов и контрасты (схема двухдозового латинского квадрата)

Поправочный коэффициент

;

Таблица 3.2.4.-14. - Сводная таблица дисперсионного анализа (двухдозовый латинский квадрат)

;

;

;

;

;

;

;

Отклонение = итог - постановки - строки - столбцы =

= 175,705 - 162,246 - 6,25 - 2,19 = 5,02.

Значимость различий дисперсий проверяют с помощью критерия Фишера. Обязательным является выполнение требований для показателей Регрессия, Непараллельность, Строки и Столбцы. Для Регрессии наблюдаемое значение критерия Фишера должно быть больше критического (p = 0,01), а для показателей Непараллельность (p = 0,05), Строки (p = 0,01), Столбцы (p = 0,01) - меньше критического. Показатель Регрессия характеризует дозозависимость, Непараллельность - параллельность двух линий регрессии, а Строки и Столбцы - сбалансированность ответов изолированного органа на протяжении всего опыта.

Для того чтобы найти F_набл. средние квадраты показателей делят на средний квадрат показателя Отклонение. Полученные результаты сравнивают с табличными критическими значениями критерия Фишера (таблица 3 Приложения). Число степеней свободы f₁ = 1 или 3, а f₂ = 6.

Дисперсионный анализ показал пригодность результатов опыта: статистическую значимость дозозависимости (Регрессия), параллельность двух линий регрессии (Непараллельность) и отсутствие статистически значимых различий между строками и столбцами (см. одноименные показатели).

Вычисление биологической активности и ее доверительных границ

Соотношение доз равно 2, следовательно I = lg2,0 = 0,3010;

t = 1,958788 + 2,429953 / f + 2,189891 / f² +

+ 4,630189 / f³ + 1,398179 / f⁹ = 2,446

при f = 6 и p = 0,05;

;

;

;

;

Ожидаемая активность A_U = 5 МЕ/мл

;

Биологическая активность R_U = 10^0,725 = 5,31 МЕ/мл

C = E / (E - s²t²) =

= 156,25 / (156,25 - 0,837 · 2,446²) = 1,033.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца вычисляют по формуле:

.

Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого образца составляют - 0,0281 и 0,0816. Нижняя и верхняя доверительная граница составляет и , т.е. 4,69 МЕ/мл и 6,03 МЕ/мл соответственно.