Определение стеринов (ГХ)

Определение проводят методом газовой хроматографии (2.1.2.27). Все операции проводят, защищая от влаги; растворы готовят непосредственно перед применением.

Испытуемый раствор. К стеринам, выделенным из испытуемого образца методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Раствор сравнения (а). К 9 частям стеринов, выделенных из рапсового масла P методом тонкослойной хроматографии, прибавляют 1 часть холестерина P. К полученной смеси добавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Раствор сравнения (б). К стеринам, выделенным из подсолнечного масла P методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную смесь 0,04 мл хлортриметилсилана P, 0,1 мл гексаметилдисилазана P и 0,5 мл пиридина безводного P и выдерживают не менее 5 мин; используют жидкую фазу.

Условия хроматографирования:

- колонка: из термостойкого кварца капиллярная, длиной от 10 м до 30 м и внутренним диаметром от 0,25 мм до 0,32 мм, заполненная поли[метил(95)фенил(5)]силоксаном P или поли(цианопропил)(7)(фенил)(7)(метил)(86)силоксаном P толщиной 0,25 мкм;

- газ-носитель: водород для хроматографии P или гелий для хроматографии P;

- линейная скорость газа-носителя: (30 - 50) см/с (водород) или (20 - 35) см/с (гелий);

- деление потока: 1:50 (водород) или 1:100 (гелий);

- температура колонки: 260 °C;

- температура блока для ввода проб: 280 °C;

- температура детектора: 290 °C;

- детектор: пламенно-ионизационный;

- объем вводимой пробы: по 1 мкл испытуемого раствора, растворов сравнения (а) и (б).

Идентификация пиков: на хроматограмме раствора сравнения (а) обнаруживаются четыре основных пика, соответствующие холестерину, брассикастерину, кампестерину и 00000560.wmz ; на хроматограмме раствора сравнения (б) обнаруживаются 4 основных пика, соответствующие кампестерину, стигмастерину, 00000561.wmz и 00000562.wmz . Относительные времена удерживания пиков стеринов по отношению к пику 00000563.wmz приведены в таблице 2.1.8.26.-1.

Таблица 2.1.8.26.-1. - Относительные времена удерживания пиков стеринов по отношению к пику 00000564.wmz для двух различных колонок

Стерины	Поли(цианопропил)(7)(фенил)(7)-(метил)(86)силоксан	Поли[метил(95)фенил-(5)]силоксан
Холестерин	0,64	0,63
Брассикастерин	0,70	0,71
24-Метилен холестерин	0,79	0,80
Кампестерин	0,82	0,81
Кампестанол	0,83	0,82
Стигмастерин	0,87	0,87
	0,93	0,92
	0,95	0,95
Клеростерин	0,96	0,96
	1	1
Ситостанол	1,01	1,02
	1,03	1,03
	1,09	1,08
<*>	1,13	1,12
	1,18	1,16
Бетулин	1,4	1,4

--------------------------------

<*> В литературе данный стерин может быть также называться 00000572.wmz .

Пик внутреннего стандарта (бетулин) должен быть четко отделен от пиков определяемых стеринов.

Идентифицируют пики, обнаруженные на хроматограмме испытуемого раствора.

Содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого раствора рассчитывают в процентах по формуле:

00000573.wmz ,

где: S_i - площадь пика стерина на хроматограмме испытуемого раствора;

00000574.wmz - сумма площадей всех пиков стеринов, указанных в таблице 2.1.8.26.-1, кроме пика бетулина.

При наличии указаний в частной фармакопейной статье содержание каждого стерина в стериновой фракции испытуемого образца в процентах рассчитывают по формуле:

00000575.wmz ,

где S - площадь пика определяемого стерина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика бетулина на хроматограмме раствора сравнения;

m - масса навески испытуемого образца в граммах;

m_S - масса навески добавленного бетулина P в миллиграммах.

Отделение стериновой фракции (ТСХ) Метод 2