Подготовка проб биологического материала

5.8. Кусочки органов мелких млекопитающих и птиц растираются в ступке или с использованием гомогенизатора (в соответствии с инструкцией к прибору) с добавлением 0,9% раствора хлористого натрия. Для исследования методом ПЦР полученная суспензия переносится в микроцентрифужную пробирку, используя наконечники с аэрозольным фильтром, центрифугируют при 3000 - 5000 об/мин в течение 1 - 2 мин.

Подготовленная надосадочная жидкость делится на аликвоты для исследования методами ИХА, ПЦР, повторения анализа и хранения:

- для ИХА в объеме 0,1 мл;

- для ПЦР-анализа в объеме 0,1 - 0,2 мл;

- для повторения анализа и хранения в холодильнике (морозильнике) или в криоконтейнере в жидком азоте в объеме 0,5 - 1,5 мл.

Для проведения ПЦР 0,1 мл надосадочной жидкости используется для выделения ДНК/РНК.

РНК-содержащий материал исследуют сразу после его выделения или хранят при температуре не выше минус 16 °C (РНК вирусов быстро гидролизуется РНК-азами).

5.9. При необходимости транспортирования материала в стационарные лаборатории для дальнейших вирусологических исследований кусочки органов или суспензии органов сохраняются в жидком азоте.

5.10. Блохи перед исследованием усыпляются эфиром, без предварительной промывки помещаются в стерильную ступку, растираются с 0,9% раствором хлористого натрия или готовится суспензия с использованием автоматического гомогенизатора. Суспензия центрифугируется при 3000 - 5000 об/мин в течение 1 - 2 мин. Надосадочная жидкость используется для постановки ИХА и ПЦР, часть сохраняют для повторного анализа и, при необходимости, для передачи в стационарную лабораторию.

5.11. Иксодовые клещи однократно промываются 96% спиртом и дважды 0,9% раствором хлористого натрия, помещаются в фарфоровую ступку, растираются или готовится суспензия с использованием автоматического гомогенизатора. К гомогенату добавляется 0,9% раствор хлористого натрия. Полученная суспензия используется для постановки ИХА и ПЦР, часть сохраняется для повторного анализа и, при необходимости, для передачи в стационарную лабораторию.

5.12. Отловленные кровососущие комары анестезируются табачным дымом (окуривание) или помещаются на 5 - 10 мин в морозильную камеру при температуре минус 10 - 16 °C для обездвиживания, разбираются на партии от 25 до 50 экз. и готовятся суспензии в фарфоровой ступке с добавлением 0,9% раствора хлористого натрия или готовится суспензия с использованием автоматического гомогенизатора.

При подготовке к исследованию комаров на наличие РНК-содержащих вирусов рекомендуется проведение манипуляций с соблюдением "холодовой цепи" с целью сохранения вирусных маркеров.