Методы лабораторной диагностики

5.5. Серологические исследования проводятся методом иммуноферментного анализа (далее - ИФА) в лабораториях, имеющих лицензию на работу с возбудителями III - IV групп патогенности, зарегистрированными на территории Российской Федерации и разрешенными к использованию тест-системами (далее - тест-системы).

5.6. Молекулярно-генетические исследования проводятся методом иммуноэлектронной микроскопии (далее - ИЭМ) <16> и полимеразной цепной реакции (далее - ПЦР) <17> в лабораториях, оснащенных необходимым оборудованием и имеющих разрешение на работу с возбудителями III - IV групп патогенности <18>.

--------------------------------

<16> МУ 1.3.2569-09 "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности", утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 22.12.2009 (далее - МУ 1.3.2569-09).

<17> МУ 1.3.2569-09.

<18> Пункты 134 - 136, 318 - 320 СанПиН 3.3686-21.

5.7. Лабораторная диагностика гепатита E включает:

- определение комплекса серологических маркеров инфицирования ВГE (анти-ВГE классов IgM и IgG) методом ИФА;

- обнаружение вируса или его компонентов методом ПЦР и ИЭМ.

5.8. Метод ИФА имеет высокую чувствительность и специфичность, является основным в лабораторной диагностике гепатита E.

Для диагностики гепатита E применяются иммуноферментные тест-системы для выявления антител классов IgG и IgM к ВГE (ИФА-анти-HEV-G и ИФА-анти-HEV-M) [2, 21]. Данные диагностикумы обладают высокой чувствительностью (93 - 100%) и специфичностью (95 - 100%).

5.9. ИЭМ был первым методом идентификации вируса гепатита E [20]. Преимуществом метода является возможность визуализации в исследуемых образцах вирусных частиц вследствие обработки их сывороткой, содержащей анти-ВГE, и возможность охарактеризовать форму и размер вирусных частиц. Метод ИЭМ имеет невысокий порог чувствительности (10⁴ - 10⁶ частиц в мл) и используется для выявления и морфологической характеристики ВГE.

5.10. Метод ПЦР является высокоспецифичным и высокочувствительным диагностическим тестом, основанным на прямом обнаружении возбудителя (РНК ВГE). ПЦР-анализ позволяет определять изоляты вируса в человеческой популяции и среди животных. Высокая специфичность ПЦР, заложенная в основных принципах (комплементарность применяемых праймеров последовательностям РНК ВГE) не исключает возможность неспецифических реакций. При отсутствии зарегистрированных в установленном порядке тест-систем, могут использоваться экспериментальные серии реагентов для ПЦР-диагностики гепатита E [2, 17].

5.11. Основными этапами проведения ПЦР являются:

- пробоподготовка исследуемых образцов с целью выделения РНК-мишени с коммерческими наборами реагентов (далее - набор реагентов);

- синтез ДНК-копии на РНК-матрице в реакции обратной транскрипции с наборами реагентов;

- амплификация комплементарной дезоксирибонуклеиновой кислоты (далее - кДНК) с использованием праймеров, расположенных на участке 3'-концевой области открытой рамки считывания 2 (ОРС 2);

- детекция продуктов амплификации проводится в 3,0% агарозном геле методом электрофореза или гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме "реального времени".

5.12. Для молекулярно-генетической характеристики (генотипирования) выявленных изолятов проводится секвенирование нуклеотидной последовательности отдельных участков генома ВГE.

5.13. При выявлении антител к ВГE класса IgM и (или) IgG методом ИФА в сыворотке крови и (или) РНК ВГE методом ОТ-ПЦР в фекалиях или сыворотке крови случай считается этиологически подтвержденным и подлежит обязательному учету и регистрации как острый вирусный гепатит уточненной этиологии.

5.14. Определение РНК ВГE рекомендуется в районах с редкими спорадическими случаями ОГE.

5.15. При отсутствии РНК ВГE в фекалиях и (или) сыворотке (плазме) крови лабораторным критерием подтверждения случая ОГE является наличие анти-ВГE классов IgM и (или) IgG с увеличением концентрации антител в 4 и более раз в парных сыворотках крови (с интервалом в 4 недели). Клинические проявления могут быть стертыми или отсутствовать.

5.16. В лабораториях, оснащенных оборудованием для проведения серологических исследований, в сыворотке крови у контактных лиц рекомендуется выявлять анти-ВГE IgM и анти-ВГE IgG.

5.17. Выявление в сыворотке (плазме) крови контактного лица анти-ВГE IgM и анти-ВГE IgG свидетельствует о заболевании ОГE или о недавно перенесенном ОГE при отсутствии серологических маркеров острых инфекций, вызванных цитомегаловирусом и вирусом Эпштейна-Барр.

5.18. При выявлении в сыворотке (плазме) крови контактного лица анти-ВГE IgM при отсутствии анти-ВГE IgG проводится повторное обследование в динамике для исключения ложноположительного результата исследования.

5.19. Выявление в сыворотке (плазме) крови контактного лица анти-ВГE IgG при отсутствии анти-ВГE IgM свидетельствует о ранее перенесенном заболевании ОГE [2, 7, 21].

5.20. В лабораториях, оснащенных оборудованием для проведения молекулярно-биологических и серологических исследований, у контактных лиц рекомендуется выявлять в сыворотке (плазме) крови и (или) фекалиях РНК ВГE и анти-ВГE IgM и анти-ВГE IgG в сыворотке (плазме) крови.

5.21. Выявление в сыворотке (плазме) крови и (или) фекалиях контактного лица РНК ВГE вне зависимости от наличия анти-ВГE IgM свидетельствует о его заболевании ОГE.

5.22. Отсутствие в сыворотке (плазме) крови анти-ВГE IgM и РНК ВГE в сыворотке (плазме) крови и (или) фекалиях свидетельствует об отсутствии инфицирования ВГE.

5.23. Выявление в сыворотке (плазме) крови контактного лица анти-ВГE IgM и анти-ВГE IgG при отсутствии РНК ВГE свидетельствует о недавно перенесенном ОГE.

5.24. При выявлении в сыворотке (плазме) крови анти-ВГE IgM при отсутствии анти-ВГE IgG в сыворотке (плазме) крови и РНК ВГE в сыворотке (плазме) крови и фекалиях проводится повторное обследование в динамике для исключения ложноположительного результата исследования.

5.25. Выявление анти-ВГE IgG рассматривается как ранее перенесенный гепатит E и является показателем наличия иммунитета.

5.26. Определение маркеров инфицирования ВГE используется для [2, 17]:

- диагностики гепатит E-инфекции;

- этиологической расшифровки вирусных гепатитов; установления доли гепатита E в структуре ОВГ в моно- и микст-варианте;

- оценки распространенности ВГE среди совокупного населения и в отдельных группах;

- определения уровня индивидуального и популяционного иммунитета к ВГE;

- оценки иммунологической эффективности вакцины против гепатита E (при наличии).