2.3. Лабораторные диагностические исследования

- Рекомендуется молекулярно-генетическая диагностика всем пациентам с НДС для верификации диагноза [26, 27].

Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

Комментарии: Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови пациентов, собранной в пробирку с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислотой), проводится по одному из стандартных протоколов очистки ДНК.

- Рекомендуется проведение анализа поиска патогенных мутаций в генах, связанных с НДС методом секвенирования нового поколения (NGS) всем пациентам [26, 27].

Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4).

Комментарии: Метод не предназначен для определения цис-, транс-положения пар гетерозиготных мутаций, а также для оценки уровня метилирования, выявления хромосомных перестроек, полиплоидии, выявления мутаций в состоянии мозаицизма.

В случае обнаружения патологических последовательностей нуклеотидов необходимо выполнить 2 этап диагностики.

В случае отсутствия обнаружения патологических последовательностей нуклеотидов из-за ограничения метода, который не позволяет выявлять инсерции и делеции длиной более 10 пар оснований, мутации в интронных областях (за исключением канонических сайтов сплайсинга), вариации длины повторов (в том числе экспансии триплетов), вариации длинны гомополимеров (более 4 нуклеотидов), а также мутации в генах, у которых в геноме существует близкий по последовательности паралог (псевдоген), возможно по показаниям проведение мультиплексной амплификации лигазо-связных проб (MLPA-анализ).

- Рекомендуется 2-ой этап молекулярно-генетической диагностики - в случае обнаружения патологических нуклеотидных последовательностей в таргетном гене методом NGS при АР-типе наследования заболевания и для валидации выявленных изменений независимо от типа наследования проводится прямое секвенирование по Сенгеру выявленных изменений [26, 27].

Уровень убедительности рекомендаций C (уровень достоверности доказательств - 4)

Комментарии: Проводится подтверждение патогенности впервые найденных внутригенных мутаций в заинтересованных генах при НДС с помощью анализирующих предсказательных программ, доказательства отсутствия данного изменения в выборке здоровых людей и/или у здоровых членов семьи, и, в случае необходимости, функционального анализа.