III. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1. Приготовление растворов:

- для приготовления 1М ТРИС - HCl (pH 7,5) в мерной колбе на 100 мл растворить 12,11 г Трис (оксиметил) аминометана в 80 мл дистиллированной воды, довести pH концентрированной соляной кислотой до 7,5, довести объем раствора до метки деионизованной водой, перемешать, хранить при температуре -20 °C в течение не более года;

- для приготовления 5М NaCl растворить 29,22 г натрия хлористого в 100 мл дистиллированной воды, перемешать, хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года;

- для приготовления 30%-ной NaOH растворить 3 г натрия гидроокиси в 7 мл дистиллированной воды;

- для приготовления 0,5М ЭДТА (pH 8,0) в мерной колбе на 100 мл растворить 18,62 г этилендиаминтетрауксусной кислоты в 80 мл дистиллированной воды, раствором 30%-ной натрия гидроокиси довести pH раствора до 8,0, дистиллированной водой объем раствора довести до метки, перемешать, хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

3.2. Приготовление хлороформа, насыщенного водой:

- смешать 100 мл хлороформа с 20 мл деионизированной воды и оставить на 24 ч для насыщения;

- срок хранения при температуре от 4 °C до 5 °C - не более 6 мес.

3.3. Приготовление 70%-го раствора этилового спирта:

- смешать 70 мл 96%-го этилового спирта с 26 мл деионизированной воды;

- срок хранения при температуре от 4 °C до 5 °C - не более 2 мес.

3.4. Приготовление раствора БСА (20 мкг/мл):

- растворить 0,002 г сухого альбумина бычьего сывороточного в 1 мл деионизированной воды, 10 мкл полученного раствора смешать с 990 мкл деионизированной воды;

- срок хранения в морозильной камере при температуре минус 20 °C - не более 6 мес.

3.5. Приготовление лизирующего буфера (2%-го "СТАВ"):

- растворить 0,5 г гексадецилтриметиламмония бромида в 10 мл деионизированной воды, добавить 2,5 мл 1M Трис - HCl, 7 мл 5М NaCl, 1 мл 0,5М ЭДТА, довести объем раствора деионизированной водой до 25 мл, перемешать;

- срок хранения при температуре от 4 °C до 5 °C - не более 6 мес.

3.6. Приготовление 1 x ТВЕ буфера для электрофореза:

- в мерной колбе на 1000 мл растворить 10,8 г Трис (оксиметил) аминометана, 5,5 г борной кислоты и 0,92 г этилендиаминтетрауксусной кислоты, довести дистиллированной водой до метки, перемешать до полного растворения;

- срок хранения 1х раствора - 10 дней.

3.7. Приготовление раствора бромистого этидия - C21H20N3Br (10 мг/мл):

- растворить 1 г бромистого этидия в 100 мл дистиллированной воды;

- срок хранения в посуде темного стекла при температуре от 4 °C до 5 °C - 12 мес.

3.8. Приготовление осаждающего буфера СТАВ:

- в мерную колбу внести 1 г СТАВ, 0,5 г NaCl, добавить 100 мл деионизированной воды, довести раствором 30%-ной натрия гидроокиси pH раствора до 8,0, довести объем деионизированной водой до 200 мл;

- хранить при 4 °C не более 6 месяцев.

3.9. Приготовление 1,2М NaCl:

- растворить 7,0 г NaCl в 100 мл деионизированной воды, перемешать;

- хранить в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре до 1 года.

3.10. Приготовление 10%-го раствора SDS:

- растворить 10 г SDS в 90 мл дистиллированной воды;

- хранить при комнатной температуре не более 1 года.