Таблица 4. Стандартный рацион вивария
┌──────────────────────────────┬──────────────────────────────────────────┐
│ Ингредиент │ Масса, г на 1 крысу в день │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Крупа овсяная │ 2,5 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Зерновая смесь │ 14,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Хлеб 2 сорт │ 4,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Творог │ 2,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Рыбная мука │ 0,5 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Мясо 2 категория │ 4,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Морковь │ 8,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Зелень │ 8,0 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Рыбий жир │ 0,1 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│Дрожжи │ 0,1 │
├──────────────────────────────┼──────────────────────────────────────────┤
│NaCl │ 0,15 │
├──────────────────────────────┴──────────────────────────────────────────┤
├─────────────────────────────┬───────────────────────────────────────────┤
│Белок │ 3,69 │
├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤
│Жир │ 1,28 │
├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤
│Углеводы │ 12,42 │
├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤
│Энергия, ккал │ 76,0 │
└─────────────────────────────┴───────────────────────────────────────────┘
6.5.2. Исследуемые показатели:
На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОВА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОВА в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1 - 0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител.
Иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА проводят согласно. Статистическую обработку результатов проводят согласно U-критерию Фишера для долевых показателей, непараметрическим критериям хи-квадрат и Мана-Уитни с использованием пакетов программ Excel и SPSS 11.5.
6.6. Генотоксикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей. Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет).
6.6.1. Схема проведения эксперимента
┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐
│Вид животных │ мыши линии С57В1/6 │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Исходная масса тела │ 18 - 20 г │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Количество животных в │ не менее 15 особей в каждой группе │
│группе в начале │ │
│эксперимента │ │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Распределение по │Животных делят на 2 группы: │
│группам │ группа "контроль" получает рацион с включением │
│ │ традиционного аналога исследуемого ГМО; │
│ │ группа "опыт" получает рацион с включением │
│ │ исследуемого ГМО │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Рацион <*> │Пищевая и биологическая ценность рациона │
│ │полностью удовлетворяет физиологические │
│ │потребности животных │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Карантин │не менее 7-ми дней │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Условия содержания │Животные получают свободный доступ к корму и │
│ │воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом │
│ │помещении │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Продолжительность │ 30 дней │
│эксперимента │ │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Забор материала для │ На 30-й день эксперимента │
│исследований │ │
└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘
--------------------------------
<*> Состав базового рациона приведен в п. 6.3.2.
6.6.2. Исследуемые показатели:
1) в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах.
2) регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий "хвост кометы", параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.
Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200х - 400х. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 "ДНК-комет". Анализ "ДНК-комет" может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.
6.7. Исследования репродуктивной токсичности ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных и включают:
1) изучение влияния на генеративную функцию;
2) изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.
6.7.1. Схема проведения эксперимента
┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐
│Вид животных │ крысы линии Вистар │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Исходная масса тела │ 70 - 80 г │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Количество животных в │ не менее 50 особей в каждой группе │
│группе в начале │ /\ │
│эксперимента │ / │
│ │ 30 о, 20 о │
│ │ + │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Распределение по │Животных делят на 2 группы: │
│группам │ группа "контроль" получает рацион с включением │
│ │ традиционного аналога исследуемого ГМО; │
│ │ группа "опыт" получает рацион с включением │
│ │ исследуемого ГМО │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Рацион <*> │Пищевая и биологическая ценность рациона │
│ │полностью удовлетворяет физиологические │
│ │потребности животных │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Карантин │не менее 7-ми дней │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Начало опытного │за 45 - 50 дней перед первым спариванием │
│вскармливания │ │
├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤
│Условия содержания │Животные получают свободный доступ к корму и │
│ │воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом │
│ │помещении │
└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘
--------------------------------
<*> Состав базового рациона приведен в п. 6.3.2.
6.7.2. Исследуемые показатели:
6.7.2.1. Интегральные показатели
┌────────────────────────────────────────────┬────────────────────────────┐
│ Изучаемые показатели │ Периодичность сбора данных │
├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤
│Общее состояние животных (внешний вид, │ каждые 2 дня │
│двигательная активность, состояние шерстного│ │
│покрова) │ │
├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤
│Поедаемость корма │ ежедневно │
├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤
│Масса тела │ каждые 7 дней │
└────────────────────────────────────────────┴────────────────────────────┘
6.7.2.2. Показатели, характеризующие генеративную функцию
┌─────────────────────────────────────────────────┬───────────────────────┐
│ Изучаемые показатели │ Сроки сбора данных │
├─────────────────────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│Морфологические исследования семенников │ половозрелые особи │
│(определяют индекс сперматогенеза, среднее │ │
│количество нормальных сперматогоний в каждом │ │
│канальце, относительное количество канальцев с │ │
│12-й стадией мейоза) │ │
├─────────────────────────────────────────────────┤ │
│Морфологические исследования яичников │ │
│(примордиальные фолликулы, фолликулы с двумя и │ │
│более слоями фолликулярных клеток, третичные │ │
│фолликулы, атретические тела, желтые тела, общее │ │
│количество генеративных форм) │ │
└─────────────────────────────────────────────────┴───────────────────────┘
6.7.2.3. Показатели, характеризующие пренатальное развитие потомства
┌─────────────────────────────────────────────────┬───────────────────────┐
│ Изучаемые показатели │ Сроки сбора данных │
├─────────────────────────────────────────────────┼───────────────────────┤
│1. Забой и вскрытие не менее 7 беременных самок │ 19 - 20-й день │
│ на группу │ беременности │
├─────────────────────────────────────────────────┤ │
│2. Визуальное исследование матки, плаценты, │ │
│ плодов: выявление живых и мертвых плодов, │ │
│ подсчет количества желтых тел, мест │ │
│ имплантации, количество резорбций по правому и│ │
│ левому рогу матки (с последующим вычислением │ │
│ пред- и постимплантационной эмбриональной │ │
│ смертности) │ │
├─────────────────────────────────────────────────┤ │
│3. Анализ эмбрионального материала (не менее 5-ти│ │
│ плодов от каждой крысы) │ │
└─────────────────────────────────────────────────┴───────────────────────┘
6.7.2.4. Показатели, характеризующие постнатальное развитие потомства
┌────────────────────────────────────────────────┬────────────────────────┐
│ Изучаемые показатели │ Сроки сбора данных │
├────────────────────────────────────────────────┼────────────────────────┤
│1. Контроль рождения потомства │ 20 - 22-й дни │
│ │ беременности │
├────────────────────────────────────────────────┼────────────────────────┤
│2. Учет величины помета в день родов, подсчет │ 1-й день жизни │
│количества живых и мертвых крысят, подсчет │ │
│особей разного пола, установление внешних │ │
│уродств, измерение массы тела, определение │ │
│краниокаудального размера │ │
├────────────────────────────────────────────────┼────────────────────────┤
│3. Учет показателей физиологического развития │ 1 - 30 дни жизни │
│крысят: срок отлипания ушных раковин, появление │ │
│первичного волосяного покрова, прорезывание │ │
│резцов, открытие глаз, опускание семенников, │ │
│открытие влагалища; выживаемость потомства │ │
├────────────────────────────────────────────────┼────────────────────────┤
│4. Измерение массы тела и роста крысят │ 1, 4, 7, 14, 21 и 25 │
│ │ дни жизни │
└────────────────────────────────────────────────┴────────────────────────┘
6.7.3. Отчет по результатам исследований репродуктивной токсичности ГМО должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на внутриутробное развитие и процессы репродукции.
- Гражданский кодекс (ГК РФ)
- Жилищный кодекс (ЖК РФ)
- Налоговый кодекс (НК РФ)
- Трудовой кодекс (ТК РФ)
- Уголовный кодекс (УК РФ)
- Бюджетный кодекс (БК РФ)
- Арбитражный процессуальный кодекс
- Конституция РФ
- Земельный кодекс (ЗК РФ)
- Лесной кодекс (ЛК РФ)
- Семейный кодекс (СК РФ)
- Уголовно-исполнительный кодекс
- Уголовно-процессуальный кодекс
- Производственный календарь на 2025 год
- МРОТ 2025
- ФЗ «О банкротстве»
- О защите прав потребителей (ЗОЗПП)
- Об исполнительном производстве
- О персональных данных
- О налогах на имущество физических лиц
- О средствах массовой информации
- Производственный календарь на 2024 год
- Федеральный закон "О полиции" N 3-ФЗ
- Расходы организации ПБУ 10/99
- Минимальный размер оплаты труда (МРОТ)
- Календарь бухгалтера на 2025 год
- Частичная мобилизация: обзор новостей