IV. Лабораторная диагностика клещевого вирусного энцефалита. Проведение вирусологического и серологического исследований

IV. Лабораторная диагностика клещевого

вирусного энцефалита. Проведение вирусологического

и серологического исследований

4.1. Материалом для вирусологического и серологического исследований являются кровь, плазма, сыворотка крови, спинномозговая жидкость больных, мозг погибших людей, иксодовые клещи.

4.2. При подозрении на клещевой энцефалит кровь и спинномозговую жидкость следует забирать в первые дни заболевания (6 - 7 дней) до начала лечения специфическим иммуноглобулином. Для серологического исследования вторую порцию крови получают через 10 - 14 дней после взятия первой. В некоторых случаях требуется исследование 3 и 4 сыворотки. В случае летального исхода исследуют суспензии мозговой ткани, взятой из различных отделов головного, а также шейного и грудного отделов спинного мозга. Вскрытие необходимо проводить не позднее 6 - 12 часов после смерти.

4.3. Кровь забирают из вены одноразовым шприцом в количестве 5 мл и переносят в стерильную пробирку. После образования сгустка для лучшей его ретракции кровь выдерживают 30 минут при 37 °C или 1 - 2 часа при комнатной температуре. Образовавшийся сгусток отделяют от стенки пробирки, обводя стерильной тонкой проволокой (стеклянной палочкой) или пастеровской пипеткой между стенкой пробирки и сгустком крови. Затем пробирку помещают на 18 часов в холодильник при температуре 4 °C. Сыворотку крови переносят в асептических условиях в другую пробирку и направляют в лабораторию с соблюдением "холодовой цепи".

4.4. Спинномозговую жидкость берут в случаях проведения пункций с лечебной или диагностической целью в количестве 2 - 3 мл, помещают в стерильную пробирку и немедленно доставляют в лабораторию с соблюдением "холодовой цепи".

4.5. Секционный материал забирается стерильно. Иссеченные кусочки объемом 2 - 3 см3 из продолговатого мозга, ствола и верхне-шейного отдела спинного мозга переносят в стерильные баночки с притертыми пробками и срочно транспортируют в лабораторию с соблюдением "холодовой цепи".

4.6. Клещей, снятых с человека, помещают в герметично закрывающуюся пробирку с небольшим кусочком чуть влажной ваты и направляют в лабораторию с соблюдением "холодовой цепи".

4.7. Исследования клещей, снятых с пациентов, на наличие в них антигена вируса клещевого энцефалита проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА) или полимеразной цепной реакции (ПЦР) для решения вопроса о необходимости назначения экстренной профилактики.

4.8. Весь направляемый материал доставляется с сопроводительными документами.

4.9. Работа по сбору, хранению, транспортировке и вирусологическому обследованию материалов от больных КВЭ и из природных очагов проводится при строгом соблюдении режима, обеспечивающего безопасность персонала.

4.10. Методы лабораторной диагностики.

4.10.1. Для обследования больных с подозрением на клещевой энцефалит могут быть использованы следующие методы лабораторной диагностики:

- вирусологический - основанный на выделении вируса клещевого энцефалита путем заражения белых мышей и клеточных культур;

- молекулярно-генетический (ПЦР) - основанный на выявлении РНК вируса клещевого энцефалита;

- серолого-иммунологические (ИФА) - основанные на выявлении иммуноглобулинов классов M и C.

4.10.2. Тест-системы, используемые для лабораторной диагностики клещевого энцефалита, должны быть разрешены к применению в установленном порядке. Исследования на присутствие возбудителя клещевого энцефалита в материале от людей и клещей с использованием лабораторных методов (полимеразно-цепная реакция, иммуноферментный анализ и другие) без выделения возбудителя могут проводиться в лабораториях, имеющих разрешительные документы на работу с микроорганизмами III - IV групп патогенности.