7.3.2.3. Проведение исследований

Для учета средней частоты структурных перестроек хромосом используются клетки жаберного эпителия, богатые митозами.

Рыбе инъецируют внутримышечно 0,4% раствор колхицина и, умертвив ее через 5 - 6 часов, отделяют жабры, которые выдерживают в течение 20 минут в 0,4% растворе KCl, фиксируют в этанол-уксусной смеси (3:1) и мацерируют ткань в 60%-ной уксусной кислоте. Клеточную суспензию наносят на предметные стекла, высушивают, окрашивают раствором Гимза.

Для анализа выбираются метафазные пластинки с явно выраженными хромосомами, располагающимися в одной плоскости без наложений.

Для каждой рыбы анализируют до 40 метафаз. Независимо от числа аберраций в одной клетке они засчитываются как одно нарушение.

Учитывают следующие виды нарушений:

а) структурные хромосомные аномалии, включающие хромосомные и хроматидные разрывы, фрагменты, дицентрики, кольцевые хромосомы, ацентрические фрагменты;

б) анеуплоидные клетки;

в) полиплоидные клетки.

Подсчитывают на одну особь количество нормальных метафаз и клеток с аберрациями хромосом, рассчитывают процент нарушений (N) по следующей формуле:

Вычисляют среднее арифметическое из N для каждой группы рыб.