1.5. Учет и анализ результатов

Для подсчета численности клеток под микроскопом используют счетную камеру Нажотта объемом 0,01 см3 (или камеру Горяева).

Подсчет клеток в камере Нажотта осуществляют следующим образом. Камеру Нажотта и покровное стекло толщиной 0,2 - 0,4 мм промывают дистиллированной водой и вытирают насухо. Из каждой контрольной или опытной колбы каплю суспензии водорослей наносят на середину камеры, покровное стекло плотно прижимают к поверхности камеры (в камере не должно быть пузырьков воздуха), дают отстояться 1 - 2 минуты, после чего начинают подсчет в пяти правых верхних и пяти правых нижних вертикальных счетных полосах. Затем выводят среднее количество клеток в одной полосе.

При большом разбросе клеток в полосах просчитывают 10 верхних и 10 нижних полос. Полученное среднее число клеток в одной полосе умножают на коэффициент 1600 и величину разведения (например, при разведении культуры в 10 раз среднее число клеток в одной полосе умножают на 10), определяя численность клеток в 1 см3.

Из каждой опытной и контрольной колбы просчитывают не менее двух камер.

Подсчет подвижных клеток водорослей (например, эксувиеллы) проводят после фиксации их формалином.

Для этого в мерную пробирку на 10 см3 помещают 1 см3 суспензии водорослей из опытных или контрольных колб. Приливают туда 9 мл питательной среды Гольдберга, перемешивают, добавляют 0,1 см3 4%-го раствора формалина, еще раз перемешивают. Затем из пробирки помещают каплю суспензии водорослей в камеру Нажотта для подсчета клеток.

По окончании эксперимента на водорослях проводят обработку полученных результатов острого и хронического опыта. Рассчитывают среднюю численность клеток водорослей в опыте и контроле (в млн. кл/см3 и в процентах).

Результаты исследования учитываются, если численность клеток водорослей в контроле увеличивается за 96 часов не менее чем в 3 раза.

При изменении численности клеток в контроле менее чем в 3 раза, результаты опыта считаются недействительными.

Достоверность различия между численностью клеток в контроле и опыте устанавливают, используя приемы статистической обработки (Приложение 4 данных Методических указаний).

Достоверность снижения (или увеличения) численности клеток в опыте по сравнению с контролем свидетельствует о наличии острого или хронического токсического (эвтрофирующего) действия исследованных концентраций вещества на водоросли.