Оценка соблюдения обязательных требований, содержащихся в данном документе, привлечение к административной ответственности за их несоблюдение допускаются до 1 сентября 2025 года (Постановление Правительства РФ от 31.12.2020 N 2467).

3.3. Условия лабораторного содержания

Парамеций выделяют из природных водных объектов или берут чистые культуры из коллекций. Из природных водных объектов банкой на 1 дм3 у самого берега зачерпывают воду с илом. В тот же день под бинокуляром просматривают пробу.

Обнаруженных парамеций последовательно переносят в микроаквариумы сначала со смесью: природная среда и культуральная среда в соотношении 2:1, затем увеличивают содержание культуральной среды в микроаквариумах через каждый час и, наконец, помещают в чистую культуральную среду.

Монокультуру простейших культивируют при комнатной температуре 20 +/- 2 °C на среде Лозина-Лозинского в чашках Петри при естественном освещении, предохраняя от воздействия прямых солнечных лучей, или в люминостате.

Используется лабораторное оборудование, приборы, посуда и реактивы, в том числе:

реактивы для приготовления среды Лозина-Лозинского;

вода дистиллированная;

бумага фильтровальная;

колбы на 1000 см3;

градуированные мерные пипетки на 10, 5, 1, 0,1 см3;

пипетки для пересадки простейших (Пастеровские пипетки с укороченным концом);

мерные колбы на 100 см3;

мерные пробирки на 10 см3;

чашки Петри;

микроаквариумы (блок камер из оргстекла);

бинокуляр МБС-9 или МБС-10;

pH-метр;

двухромовокислый калий K Cr O марки "хч" или стандарт-титр калия

2 2 7

двухромокислого;

культура простейших (Paramecium caudatum Ehrenberg1838);

сухие пекарские дрожжи.

Состав минеральной среды Лозина-Лозинского для культивирования P.caudatum:

в 1 дм3 дистиллированной воды растворяют:

NaCl - 0,1 г;

KCl - 0,01 г;

CaCl - 0,01 г;

2

MgCl - 0,01 г;

2

NaHCO - 0,02 г.

3

В качестве корма используют хорошо высушенные и измельченные пекарские дрожжи, которые легко хранить в закрытой посуде. Вносят их в чашки Петри в очень небольшом количестве на кончике скальпеля или делают суспензию дрожжей и стерильной пипеткой производят подкормку парамеций из расчета 2 - 3 капли на чашку Петри. Можно в качестве корма использовать (на чашку Петри) частицу дробленого зерна риса.

Два раза в неделю рекомендуется просматривать состояние культуры в чашках Петри. Через две недели культуру пересаживают, т.е. 100 - 300 особей пипеткой переносят в чашку Петри с чистой средой, куда добавляют один из названных видов корма.

Не реже 1 раза в месяц проводят оценку физиологической чувствительности

организмов. Для этого используют эталонное (стандартное) вещество -

двухромовокислый калий K Cr O марки "хч" или стандарт-титр калия

2 2 7

двухромокислого. Готовят маточный раствор двухромокислого калия

концентрацией 1 г/дм3. Далее методом разбавления готовят серию растворов с

концентрациями 100,0; 150,0; 200,0; 250,0 и 300,0 мг/дм3. Исследование

проводят в течение 24 ч. По результатам эксперимента рассчитывают летальную

концентрацию K Cr O , вызывающую гибель простейших на 50% (ЛК за 24 ч).

2 2 7 50

Если полученные значения ЛК находятся в интервале 170 - 220,0 мг/дм3, то

50

культура может быть использована для проведения экспериментов.

Если полученные значения ЛК не попадают в интервал 170 - 220 мг/дм3,

50

эксперименты с простейшими не проводят, выясняют причину этого, эксперимент

повторяют.