5.1.2. Условия лабораторного содержания

Используется обычное лабораторное оборудование, приборы, посуда и реактивы, в том числе:

микрокомпрессоры;

микроскоп биологический, обеспечивающий увеличение в 100 - 200 раз;

оксиметр;

pH-метр;

прибор для определения солености воды;

мембранные фильтры (размер пор 0,45 мкм и 3 - 5 мкм);

дистиллированная вода;

стеклянные бутыли на 20 л - 2 штуки;

стаканы лабораторные на 50, 100, 300, 500, 1000 см3;

чашки Петри;

градуированные пипетки на 10, 5, 1, 0,1 мл;

пипетки Пастера стеклянные, вместимостью 2 см3 с укороченным и оплавленным концом для пересадки рачков;

реактивы марки "хч", а также морская соль;

сухие яйца Artemia salina L. (хранятся в холодильной камере).

Исследование с артемиями (Artemia salina L.) проводят при искусственном или естественном освещении, температуре 20 +/- 2 °C, от выклева из яйца (односуточные науплии) до половозрелого состояния (21 сутки) на природной морской воде или на искусственной морской воде определенной солености.

При проведении экспериментов с артемиями на искусственной морской воде, последняя служит контролем в экспериментах.

В связи с эндогенным питанием науплиусы артемий не нуждаются в подкормке в течение четырех суток после выклева. В дальнейшем в качестве корма для них используют культуры одноклеточных перидиниевых водорослей из родов Phaeodactylum и Exuviella, или желто-зеленых жгутиковых водорослей Nephrochloris salina, выращиваемых на среде Гольдберга.

Плотность клеток водорослей в среде с рачками при их кормлении - 100 тыс. кл/см3 (слегка зеленоватый или бежевый цвет среды). Подкармливают рачков через 2 суток.

При достаточном внесении корма рачки распределяются равномерно по всей толще воды и активно движутся. При недостатке корма артемии задерживаются у стенок и дна аквариума, взмучивая осадок, при излишке корма собираются у поверхности воды, при этом движение становится замедленным.

В опыт необходимо брать яйца артемий с высоким процентом выклева (60 - 100%).

Чтобы получить исходный материал для исследования, 1 - 3 г сухих яиц помещают в химический стакан объемом 500 мл и заливают водопроводной водой, заранее отстоянной и аэрируемой в течение суток. Через 30 мин., не взбалтывая содержимого стакана, сливают слой воды над осевшими яйцами, удаляя таким образом пустые оболочки яиц и погибшие яйца. Процедуру очистки повторяют несколько раз.

Отмытые яйца вновь заливают пресной водой, подводят аэрацию и выдерживают в таком состоянии в течение суток. Через сутки пресную воду сливают и яйца несколько раз промывают фильтрованной и проаэрированной морской водой нужной солености с pH 7,8 - 8,2.

Промытые яйца для выклева помещают в плоский кристаллизатор, наполненный морской водой нужной солености. Содержимое кристаллизатора взбалтывают, при этом яйца располагаются по дну монослоем. Через 18 - 24 часа в кристаллизаторе вылупляются первые личинки. Для дружного выклева необходима аэрация и освещенность не менее 1500 - 2500 лк/м2.

Для получения синхронизированного материала первых выклюнувшихся науплиусов Artemia salina L. тщательно отбирают пипеткой Пастера и переносят в стакан (объемом 150 см3) с морской водой. Через час в кристаллизаторе накапливаются новые науплиусы. Отбирают и переносят науплиусов в тот же стакан с морской водой по мере их выклева - 2 - 3 раза в течение трех часов, концентрируя организмы возле одной из стенок направленным источником света (новорожденные науплиусы имеют положительный фототаксис). Далее односуточные науплиусы Artemia salina L. используют в эксперименте.