4.4. Проведение исследований

Токсикологические исследования проводят только на одновозрастной культуре коловраток.

Для получения большого количества одновозрастной культуры отбирают 50 активных самок с яйцами и помещают по одной в микроаквариумы объемом 0,5 см3 каждый (планшет с ячейками). Появившуюся молодь переносят в новые микроаквариумы, заполненные морской водой и кормом. Третий помет коловраток, как правило, является наиболее плодовитым, поэтому, при необходимости использования в эксперименте большого количества организмов, удобнее работать с одновозрастной молодью третьего помета.

Возможно так же получение односуточной культуры для проведения эксперимента путем замачивания яиц коловраток в морской воде. При этом происходит синхронизированный выклев молоди коловраток, что очень важно при постановке опыта.

Односуточная молодь становится половозрелой через 1 - 2 суток (появляется первое яйцо) и дает массовый вымет молоди через 3 - 4 суток.

Исследование токсического действия веществ на тест-организмы проводят в острых и хронических экспериментах.

Предварительный эксперимент проводят с 4 - 5 концентрациями вещества, различающимися в 10 раз; например: 0,001; 0,01; 0,1; 1; 10 мг/дм3 и т.д. Этот опыт позволяет установить границы остролетальных концентраций вещества.

Основной эксперимент проводят по результатам предварительного. Выбирают диапазон концентраций вещества, которые вызывают гибель меньше 50% и больше 50% коловраток в предварительном эксперименте. Шаг между концентрациями различается в 2 - 5 раз.

В экспериментальные микроаквариумы объемом по 0,5 мл помещают растворы исследуемых концентраций вещества. В каждый микроаквариум рассаживают по одному экземпляру коловраток возрастом 1 сутки, начиная с контроля и далее от наименьшей концентрации по возрастанию. В контроле и в эксперименте (в каждой концентрации) используют по 20 коловраток.

Условия проведения опытов такие же, как и при культивировании данного объекта. В ходе острых опытов коловраток не кормят.

4.4.2. Хроническое токсическое действие вещества исследуют около 2 недель (11 - 14 дней).

Исследование проводят на 3-х поколениях коловраток. По результатам исследования оценивают (по сравнению с контролем):

а) выживаемость коловраток в разных концентрациях вещества в исходном, в 1-м, 2-м и 3-м поколениях;

б) наступление половозрелости в каждом из трех поколений;

в) плодовитость коловраток в каждом поколении и общую плодовитость.

Половозрелость коловраток отмечают с момента появления первого яйца. Плодовитость коловраток - количество молоди, появившейся в каждом поколении. Общая плодовитость коловраток в каждом поколении определяется как сумма всей молоди за 4 вымета.

В контроле и опыте (в каждой концентрации) используют не менее 20 коловраток, помещая в каждую лунку микроаквариума по одному экземпляру возрастом 6 +/- 2 ч.

Коловраток во время проведения эксперимента кормят водорослями раз в 2 - 3 суток. Концентрация клеток водорослей та же, что и при культивировании коловраток. Предварительно культуру водорослей концентрируют центрифугированием. Концентрированный корм добавляют в каждую лунку на кончике пастеровской пипетки.

При проведении опытов на поколениях коловраток (Таблица 4.4.1) придерживаются схемы, аналогично проведению опытов с дафниями.